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如何用比色法测定植物提取物中蒽醌类的含量

2016-10-09 09:43:40 浏览次数:0

 植物提取物中的蒽醌类及其苷大多数是黄色或橙红色的,羟基蒽醌能溶于碱溶液中而显红或紫红色;蒽酚和二葸醌与碱液不显红色,只能呈黄色,需经氧化成羟基蒽醌后才与碱作用显红色;羟基蒽醌类因结构不同与乙酸镁的甲醇溶液反应可显橙、红、蓝、紫等色,根据此性质可进行比色测定。
1.标准曲线的绘制
取经五氧化二磷干燥24h的大黄素(或大黄酸、1,8-=羟基蒽醌)对照品适量,用碱液(Imol/L氢氧化钠溶液或其与2%氢氧化铵溶液的混合溶液)或0.5%一1%乙酸镁甲醇溶液定容,在500~550nm波长处扫描,在最大吸收波长处测定吸光度,以吸光度对浓度绘制标准曲线,线性范围4~24ug/ml。
2.游离蒽醌的测定
取药物细粉或其制剂粉末适量(约相当于游离蒽醌1. 5mg)加乙醚(或氯仿)溶解,或用索氏提取器回流提取至提取液无色。将乙醚挥干,残渣用甲醇溶解,加乙酸镁甲醇溶液至定容;或将乙醚提取液移入分液漏斗中,用碱液提取并定容,比色测定,依标准曲线计算含量。
3.总蒽醌的测定
(1)先水解后提取  取供试品适量(约相当于总蒽醌1.5mg),用酸液(1—7. 5mol/L硫酸溶液或1.5~6mol/L盐酸溶液)20~30ml,水浴回流1~2h,以使结合态的蒽醌苷水解,使葸醌游离,再用乙醚(或氯仿)萃取,并将过滤的药物残渣及滤纸经50℃干燥后用乙醚回流提取,待索氏提取器内提取液无色,合并乙醚液,照游离蒽醌测定法测定。
对含还原型蒽酮苷(如番泻苷)的样品,根据其可被氯化铁氧化,酸水解成氧化型蒽醌苷元这一原理,称取供试品适量,加水30ml超声处理1 5-30min(提高溶解、提取效率,大大缩短溶解、提取时间),加10. 5%氯化铁溶液20ml,回流20~60min,加盐酸1~3ml继续回流30min,放冷,再进行萃取与测定。
蒽醌类与碱液显色后,过氧化氢不能使其褪色,而其他有色物质可被其氧化褪色,对含有干扰测定成分的碱萃取液,加1%过氧化氢溶液少量,在沸水浴中加热4min氧化,冷却,定容,比色测定。
(2)先提取后水解  取供试品适量,加甲醇(或乙醇、氯仿等),对含葸醌的浸膏制剂,超声处理30min,使溶解。对含蒽醌的原植物药粉末制剂,应置索氏提取器中回流提取,至提取液无色,将甲醇回收至干,残渣用酸液水解,乙醚(或氯仿)萃取,依法测定。
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